Είχε αρκετούς μικρούς ρόλους σε ταινίες όπως Τα Καλά Παιδιά (Goodfellas, 1990) πριν συναντήσει τον μέντορά του, Μόργκαν Φρίμαν, και το σκηνοθέτη Σπάικ Λι. Αφού κέρδισε κριτική αναγνώριση για το ρόλο του στην ταινία Ο Πυρετός της Ζούγκλας (Jungle Fever) το 1991, εμφανίστηκε σε ταινίες όπως Παιχνίδια Ολέθρου (Patriot Games, 1992), Φιλαράκια για Δέσιμο (Amos & Andrew, 1993), Ιλιγγιώδης Έρωτας (True Romance, 1993) και Τζουράσικ Παρκ (Jurassic Park, 1994). Το 1994, πήρε το ρόλο του Τζουλς Γουίνφιλντ στο Pulp Fiction και για την ερμηνεία του έλαβε αρκετές υποψηφιότητες για βραβεία, ανάμεσά τους και υποψηφιότητα για Όσκαρ Β’ Ανδρικού Ρόλου, και κριτική αναγνώριση.
Ο Τζάκσον έχει εμφανιστεί σε περισσότερες από 100 ταινίες όπως: Πολύ Σκληρός για να Πεθάνει: Η Εκδίκηση (Die Hard with a Vengeance, 1995), Τζάκι Μπράουν (Jackie Brown, 1997), Shaft, ο Μαύρος Πάνθηρας (Shaft, 2000), Άφθαρτος (Unbreakable, 2000), Ωραία Μέρα για να Πεθάνεις (The 51st State, 2001), Οι Απίθανοι (The Incredibles, 2004), Black Snake Moan (2006), Snakes on a Plane (2006) καθώς και την πρίκουελ τριλογία Ο Πόλεμος των Άστρων (Star Wars) και μικρούς ρόλους στις ταινίες του Κουέντιν Ταραντίνο, Kill Bill Vol. 2 και Άδωξοι Μπάσταρδη (Inglourious Basterds, 2009).
Υποδύθηκε τον Νικ Φιούρι στις ταινίες:
- Iron Man (2008),
- Iron Man 2 (2010),
- Thor (2011),
- Ο Πρώτος Εκδικητής: Captain America (Captain America: The First Avenger, 2011) ,
- Οι Εκδικητές (The Avengers, 2012),
- Captain America 2: Ο Στρατιώτης του Χειμώνα (Captain America: The Winter Soldier, 2014)
- και Οι Εκδικητές: Η Εποχή του Ultron (Avengers: Age of Ultron, 2015) τις πρώτες εφτά από τις συνολικά εννιά ταινίες του Κινηματογραφικού Σύμπαντος της Marvel στις οποίες θα εμφανιστεί ο Τζάκσον.
- Το 2012 εμφανίστηκε στην ταινία Django: Ο Τιμωρός (Django Unchained) σε σκηνοθεσία Κουέντιν Ταραντίνο.
- Οι πολλοί του ρόλοι, έχουν κατατάξει τον Τζάκσον έναν από τους πιο επιτυχημένους ηθοποιούς όσο αναφορά το box office.
- Tον Οκτώβριο του 2011, ο Τζάκσον ξεπέρασε τον Φρανκ Γουέλκερ ως τον ηθοποιό με τις περισσότερες εισπράξεις.